電泳中緩沖液的用途
生物化學(xué)家和分子生物學(xué)家使用電泳儀來分離大分子，例如蛋白質(zhì)和核酸。這使科學(xué)家能夠分離和分析復(fù)雜混合物中的單個蛋白質(zhì)或核酸序列。實驗室中電泳的一個典型例子是微生物學(xué)家，使用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）分離微生物群落中產(chǎn)生的DNA片段。無論目的如何，電泳儀始終需要使用緩沖液。
電泳通過大小，電荷和其他特性將大分子（如蛋白質(zhì)和核酸）分開。對于通過電荷分離的電泳，科學(xué)家使用緩沖液將電荷傳輸通過凝膠。緩沖液還將凝膠保持在穩(wěn)定的pH值，從而**大程度地減少了在不穩(wěn)定的pH值下蛋白質(zhì)或核酸發(fā)生的變化。
電泳原理
電泳根據(jù)分子的大小，電荷或其他特性沿梯度將其分離。該梯度可以是電場，或者在變性梯度凝膠電泳（DGGE）的情況下，可以是變性劑，例如尿素和甲酰胺的混合物。如果帶負(fù)電荷，蛋白質(zhì)將向陽極遷移，如果帶正電荷，則蛋白質(zhì)將向陰極遷移。由于大分子的遷移要比小分子慢，因此科學(xué)家可以測量行進(jìn)的距離并使用對數(shù)確定碎片的大小。
變性梯度凝膠電泳
借助DGGE，DNA沿著變性能力增強的梯度移動，直到該能力足以使特定的DNA片段*變性或展開。此時，遷移停止。科學(xué)家可以使用這種方法根據(jù)片段對變性的敏感性來分離片段。
緩沖區(qū)的作用
在電泳基于電荷分離的情況下，緩沖液中的離子會傳輸分離所需的電荷。通過提供弱酸和弱堿的緩沖液，緩沖液還將pH值保持在狹窄的范圍內(nèi)。這很重要，因為蛋白質(zhì)或核酸的結(jié)構(gòu)和電荷在pH發(fā)生明顯變化時會發(fā)生變化，從而阻止了正確的分離。
典型緩沖器
對于將電泳凝膠維持在不同的所需pH范圍，不同的緩沖液是理想的。科學(xué)家為此目的使用的典型緩沖液包括乙酸，硼酸，磷酸和檸檬酸以及甘氨酸和牛磺酸。通常，pKa值（酸解離常數(shù)）應(yīng)接近所需的pH。對于我們而言，**好提供低電荷量的緩沖器，以免傳導(dǎo)過多電流。
